Тест-системи четвертого покоління для одночасного виявлення антигенів ВІЛ і антитіл до ВІЛ (продовження... )

Імуноблотінг: Імуноблотинг - найпоширеніший підтверджуючий тест для виявлення антитіл до ретровірусів; більшість фахівців вважають цей метод еталонним при підтвердженні ВІЛ-інфекції. Метод заснований на електрофоретичному розподілі антигенів ВІЛ, отриманих з лізату вірусів, вирощених в клітинній культурі. При електрофорезі вірусні білки денатуруються, набувають негативний заряд і розділяються по молекулярній масі. Поділ вірусних антигенів дозволяє виявляти специфічні антитіла до кожного з них в ході подальшого аналізу, методологічно схожого з ІФА. Суміш очищених антигенів ВІЛ вносять в кілька лунок на краю пластини поліакріламідного гелю, що містить додецилсульфат натрію, після чого проводять електрофорез. При цьому антигени ВІЛ з кожної лунки мігрують вздовж пластини гелю. Швидкість міграції визначається зарядом і молекулярною масою антигенів (так, високомолекулярні антигени проходять меншу відстань від точки старту). Після завершення електрофорезу гель накладають на нітроцелюлозну мембрану і переносять на неї розділилися антигени (ця процедура називається блоттінгом і проводиться шляхом електропереносу). Мембрану розрізають на смужки, на кожній з яких представлений повний набір антигенів ВІЛ. На смужки наносять тестовану або контрольну сироватку в розведенні 1:50 або 1:100, інкубують і відмивають. З цього моменту методика схожа з будь-яким непрямим імунним аналізом. Смужки інкубують з міченими антитілами проти людських імуноглобулінів. В якості мітки зазвичай використовують фермент (пероксидазу або лужну фосфатазу), який каталізує перетворення безбарвного хромогенного субстрату в забарвлений нерозчинний продукт. В результаті на смужці утворюються поперечні забарвлені смуги в тих місцях, де утворилися комплекси антиген-антитіло. Позитивні сироватки дають набір смуг, характерний для ВІЛ-інфекції. Багато з цих смуг були ідентифіковані як специфічні продукти вірусних генів. Антигени ВІЛ-1 при електрофорезі розподіляються наступним чином (починаючи від точки старту): gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17, p15. Буквою «p» позначають білки, літерами «gp» - гликопротеиды. Цифрами позначають молекулярну масу антигенів (кДа). При аналізі результатів імуноблотінгу треба пам'ятати, що у вихідному лізаті містяться не тільки антигени ВІЛ, але й білки культивованих клітин, в яких вірус розмножувався. Ці білки можуть утворювати смуги в різних місцях, найчастіше - у зоні між 40 і 60 кДа. Неспецифічне зв'язування антитіл з досліджуваної проби з клітинними білками може ускладнити оцінку результатів.

Інтерпретація результатів: В залежності від того, які антитіла до ВІЛ присутні в досліджуваній пробі, на нітроцелюлозних смужках видно різні набори смуг. За характеристикою набору смуг (їх числа і інтенсивності фарбування) і судять про те, присутні в пробі антитіла до ВІЛ. Результати імуноблотінгу оцінюють за певними критеріями. Згідно з цими критеріями, проба вважається позитивною, якщо присутні принаймні дві з трьох смуг, відповідних антигенів p24, gp41 і gp120/160. Проба вважається негативною тільки в тому випадку, коли немає ні однієї зі смуг, відповідних антигенів ВІЛ. Проте дві організації, включаючи ВООЗ, дотримуються думки, що пробу можна вважати негативною, якщо є лише одна дуже слабо забарвлена смуга p17. Результат уважається сумнівним, якщо є одна смуга або більше, відповідна антигенів ВІЛ, але критерії позитивного результату не виконуються.

На жаль, сироватки деяких людей, не інфікованих ВІЛ, при іммуноблоттінгу в тій чи іншій мірі реагують з одним або декількома антигенами ВІЛ. Така реакція буває майже у 15% здорових людей, не інфікованих ВІЛ; вона нерідко спостерігається у осіб з негативним результатом скринінгового тестування. Таким чином, багато сироватки, дали негативний результат при скринінговому тестуванні методом ІФА, дадуть сумнівний результат при іммуноблоттінгу. У більшості випадків при сумнівних результатах слабо забарвлюються смуги, що відповідають білкам поліпротеїну Gag (головним чином, p17, p24 та/або p55). Зустрічаються і інші набори смуг, але рідше. Будь-який результат імуноблотінгу, не задовольняє критеріям позитивного або негативного результату, повинен вважатися сумнівною.

Як допомогти хворому на Снід комфортно відчувати себе вдома

Хворі Снідом повинні самі дбати про себе в тому обсязі, в якому можуть це робити, і до тих пір, поки будуть в змозі. Вони повинні відчувати себе настільки незалежними, наскільки це можливо. Вони повинні контролювати свій розпорядок життя, самі приймати рішення, робити те, що хочуть і стільки, скільки в змозі. Вони повинні виробити свій власний режим фізичних навантажень і харчування. Крім регулярних візитів до лікаря, багато людей, що хворіють на Снід, намагаються підтримувати своє здоров'я за допомогою правильного режиму харчування, регулярного сну, фізичного навантаження, молитов або медитацій, а також інших речей. Якщо людина, за якою ви доглядаєте, прагне знайти щось, що могло б допомогти йому справлятися з хворобою, підтримайте його починання. Фізичні вправи можуть допомогти підтримати оптимальну вагу і м'язовий тонус, завдяки чому людина буде почувати себе краще, звичайно, якщо програма вправ відповідає потребам і побажанням хворого. Збалансована, смачна їжа допомагає хворим відчувати себе добре, дає їм енергію і допомагає організму боротися з хворобою. ВІЛ-інфіковані, відчувають себе краще, якщо не вживають алкоголь, тютюн і заборонені наркотики. Також дуже важливо стежити за новими видами лікування і розуміти, чого можна очікувати від прийнятих ліків.

Існує декілька простих речей, які ви можете здійснити, щоб допомогти хворому на Снід комфортно відчувати себе вдома.

• Поважайте їх незалежність і приватність.
• Надайте їм якомога більше повноважень. Запитуйте дозволу увійти в їхню кімнату, присісти поруч з ними, і т. д., кажучи: «Я можу тобі допомогти? ». Вони повинні відчувати свою самостійність.
• Запитуйте, що ви можете зробити, щоб їм було комфортніше. Багато людей соромляться просити допомоги, особливо це відноситься до таких речей, як відвідування туалету, купання, гоління, їжа та одягання.
• Тримайте будинок в чистоті, будьте доброзичливим і привітним.
• Організуйте кімнату хворого на Снід поруч з ванною кімнатою.
• Залишайте серветки, рушники, кошик для сміття та інші речі, які можуть знадобитися хворому, недалеко від його ліжка або крісла, щоб він, у разі потреби, міг до них дотягнутися.

Якщо людина, за якою ви доглядаєте, змушений більшу частину часу проводити в ліжку, переконайтеся в тому, що він часто змінює положення. Якщо це можливо, хворий Снідом повинен якомога частіше вставати з ліжка. Медсестра покаже вам, як допомогти хворому переміститься з ліжка в крісло, не пошкодивши себе і вашого підопічного. Це допоможе уникнути малорухомості суглобів, пролежнів і деяких видів пневмонії. Для того щоб повернутися, збити подушки або поправити ковдру хворому теж може знадобитися ваша допомога. Спеціальна надкроватная трапеція може допомогти йому самостійно міняти положення, якщо у хворого буде достатньо сили. Еслион настільки слабкий, що не може самостійно перевернутися, нехай медсестра покаже вам, як за допомогою простирадла можна допомогти людині перевертатися з боку на бік. Зазвичай лежачому хворому необхідно міняти положення, як мінімум, кожні 4 години.

Пролежні

Пролежні та інші ушкодження шкіри можуть стати серйозною проблемою для хворих на Снід. Крім частої зміни положення в ліжку, для того, щоб шкіра залишалася здоровою, під хворим повинен знаходитися дуже м'який матеріал (матрац з овчини, медичної піни або водний матрац), простирадла повинні бути сухими, без складок, спину й інші частини тіла (стегна, лікті і щиколотки), які стикаються з ліжком, необхідно масажувати. Відразу ж повідомляйте лікаря або медсестри про будь почервоніння або пошкодженнях шкіри.

Вправи

Навіть перебуваючи в ліжку, хворий може робити просту зарядку для рук і ніг. Такі вправи необхідно робити щодня. Вони запобігають затвердіння м'язів і суглобів, покращують циркуляцію крові. Лікар, медсестра або фізіотерапевт покажуть вам, як ви можете допомогти.

Дихання

Якщо у хворого виникають проблеми з диханням, ви можете допомогти йому підвестися на ліжку або перейти в положення сидячи. Підніміть узголів'я медичної ліжка або підкладіть додаткові подушки або ковдру під спину хворого. Якщо у нього виникають проблеми з диханням, викличте лікаря.

Комфорт

Розтирання спини може допомогти людині розслабитися і покращує циркуляцію крові. Медсестра, фізіотерапевт або фахівець з масажу може підказати вам, як правильно розтирати м'язи спини. Залишайте книги, пульти, питну воду, рушники і дзвіночок, з допомогою якого можна покликати на допомогу, в межах досяжності хворого. Якщо хворий не піднімається з ліжка, поставте сечоприймач або подкладное судно неподалік від його ліжка.

Надання емоційної підтримки

Ви доглядаєте за людиною, а не тільки за його тілом, почуття хворого мають велике значення. Оскільки кожна людина індивідуальна, немає якихось єдиних правил щодо того, як слід себе вести, однак деякі поради можуть бути корисними.

• Підключайте хворого до догляду за собою. Не робіть для нього все, не приймайте замість нього всі рішення.
• Дозвольте хворому допомагати вам виконувати якусь роботу по дому, якщо він цього хоче. Всі хочуть бути корисними. Хворі Снідом теж хочуть бути частиною колективу, вносити свій корисний внесок.
• Підключайте хворого до спілкування з родиною. Залучайте до обговорення книг, телевізійних програм, музики, подій у світі, і т. д. Багато людей хочуть відчувати свою причетність до речей, що відбуваються навколо. Вам не потрібно підтримувати бесіду, іноді достатньо просто того, щоб побути з хворим поруч. Спільний перегляд телевізора, читання в одній кімнаті - часом одне це вже приносить задоволення людині.

• 1 2 Наступна »
  
  
  

Стратегії виявлення антитіл для ранньої діагностики ВІЛ-інфекції

Рання діагностика ВІЛ-інфекції корисна з кількох точок зору.

По-перше, в таких випадках простіше виявити контакти ВІЛ-інфікованої з споживачами ін'єкційних наркотиків і статевими партнерами (це має сенс, якщо з моменту зараження пройшло не більше 4 місяців). По-друге, оскільки високе вірусне навантаження на ранніх стадіях інфекції підвищує ризик передачі ВІЛ оточуючим, виявлення груп населення з високою захворюваністю дає можливість проводити цілеспрямовані профілактичні втручання. Спостереження за популяціями з високою захворюваністю має велике значення для організації ранньої діагностики ВІЛ-інфекції у новонароджених і своєчасного початку антиретровірусної терапії, дозволяє прогнозувати зростання захворюваності, виділяти групи населення для профілактичної вакцинації і підбирати пацієнтів з ранніми стадіями ВІЛ-інфекції для участі в дослідженнях її патогенезу і нових способів лікування.

Розроблені лабораторні методики (модифікації ІФА або експрес-тестів), з допомогою яких можна відрізнити недавню ВІЛ-інфекцію від довгостроково існуючої. Вони засновані на оцінці титру та авідності антитіл до ВІЛ. Такі методики називають високо/низькочуттєвими (В/М) або загрубленими.

У період між зараженням і появою антитіл до ВІЛ (тобто в період вікна) ВІЛ-інфекцію можна підтвердити тільки шляхом виявлення антигену p24 або вірусної РНК чи ДНК. Аналізи на антитіла до ВІЛ, навіть найчутливіші, не дозволяють виявити інфекцію раніше, ніж через 3 тижні після зараження. З моменту виявлення їх титри антитіл поступово зростають, через 3-5 місяців досягають максимуму і тримається на цьому рівні протягом усього життя хворого. Антитіла, які утворюються на ранніх термінах після зараження, зазвичай мають низьку авідність, яка зростає по мірі прогресування ВІЛ-інфекції. Таким чином, за титру та авідності антитіл можна відрізняти недавню ВІЛ-інфекцію від довгостроково існуючої і оцінювати час, що минув з моменту зараження. Так, якщо титр або авідність антитіл низькі, зараження швидше за все відбулося в межах останніх 4 місяців. Якщо ж титр або авідність високі, то з моменту зараження пройшло більше 4 місяців.

Перша В/Н-методика заснована на оцінці титру антитіл до ВІЛ. У пробах, отриманих на ранніх стадіях інфекції, титр антитіл низький, але достатній для того, щоб проби давали позитивну реакцію при звичайному (високочутливому) аналізі. При розведенні таких проб титр антитіл падає нижче межі чутливості методу і результат аналізу стає негативним (модифікований, або низькочутливий аналіз). Якщо у розведеній пробі антитіла не виявляються, вважають, що зараження сталося нещодавно. Якщо ж після розведення проби реакція залишилася позитивною, значить, вихідний титр антитіл був високим, т. е. після зараження пройшло вже багато часу. Цю В/Н-методику використовують тільки в тих випадках, коли наявність антитіл до ВІЛ підтверджено імуноблотінгом (за критеріями Центрів контролю і профілактики захворювань). При негативному результаті імуноблотінгу визначати термін зараження не має сенсу. Описана В/Н-методика, відома як «Алгоритм серологічного виявлення недавньої ВІЛ-сероконверсії» (STARHS), була розроблена і прийнята на озброєння Центрами контролю та профілактики захворювань. Вперше з цією метою використовували тест-систему 3A11 фірми Abbott. Це високочутливий тест-система першого покоління для непрямого ІФА на антитіла до ВІЛ-1, сертифікована Управлінням з контролю якості харчових продуктів і лікарських засобів США; повне найменування: Abbott HIV-1 Viral Lysate ELISA (3A11). У процесі розробки і налагодження методики використовували проби сироватки або плазми пацієнтів із сероконверсією і відомими термінами зараження. Для зниження чутливості у процедурі ІФА 3А11 змінили 4 параметри: розводили проби в 20 000 раз, скоротили до 30 хвилин терміни інкубації проб з антигеном і кон'югатом і змінили спосіб розрахунку критичної ВП.

Для кожної проби визначали нормовану ВП за формулою:

Нормована ВП = (ВП досліджуваної проби – ОП контрольної негативної проби)/ВП контрольної позитивної проби.

Шляхом аналізу великої кількості проб встановили, що критична нормована ОП дорівнює 0, 75. Якщо при низькочутливим аналізом нормована ВП проби, дала позитивний результат високочутливому аналізі, виявляється менше 0, 75, то проба отримана до сероконверсії. Підрахували, що у осіб, які отримують такі проби, термін після зараження в середньому становить 129 днів (95% довірчий інтервал = 109-149 днів), тобто приблизно 4 місяці.

Надійність цій В/Н-методики була доведена в декількох дослідженнях, в яких брали участь ВІЛ-інфіковані на ранніх термінах після зараження (що підтверджувалося клінічними даними, належністю до груп високого ризику і результатами імуноблотінгу і визначення антигенів ВІЛ і вірусної РНК). Треба зазначити, що В/Н-методики, засновані на розведенні проб, дають хибнопозитивні результати при аналізі проб, отриманих від осіб з довгостроково існуючої ВІЛ-інфекцією (0, 4% випадків) та у хворих зі Снідом (у 2% випадків). Тому для остаточного підтвердження результатів потрібні підрахунок лімфоцитів CD4 і клінічні дані. В/Н-методики, засновані на розведенні проб, дешеві, добре відтворюються і дозволяють досить точно оцінити термін зараження. Оскільки ІФА 3А11 був знятий з виробництва, йому на зміну прийшли інші тест-системи з такими ж характеристиками (наприклад, тест-системи фірм Vironostika і bioMérieux). Нещодавно фірмою Calypte (Лейк Освего, Орегон, США) була випущена тест-система BED для кількісного визначення антитіл до ВІЛ методом ловушечного ІФА. Ця тест-система дозволяє встановити строк зараження у осіб, які інфіковані ВІЛ, не належать до підтипу B. Крім того, ця тест-система дає можливість визначити підтип ВІЛ (B, E, C та A/D), оскільки в ній використовуються синтетичні пептидні фрагменти відповідних антигенів ВІЛ.

Друга В/Н-методика для визначення терміну зараження з метою оцінки захворюваності була розроблена з застосуванням третього покоління тест-систем на антитіла до ВІЛ. Вона заснована на аналізі авідності антитіл до ВІЛ і відома під назвою «Визначення коефіцієнта авідності». Авідність - це характеристика популяції антитіл, відбиває міцність їх зв'язування з різними детермінантами одного антигену. Оцінка авідності застосовується в діагностиці різних інфекційних захворювань, і дозволяє виявляти гостру інфекцію, диференціювати первинну інфекцію і її рецидив, а також встановлювати діагноз гострої інфекції з використанням єдиної проби.

Скринінгові тести на антитіла ВІЛ

Тести на антитіла до ВІЛ можна підрозділити на скринінгові та підтверджувальні, або допоміжні. Перші призначені для виявлення всіх осіб, інфікованих ВІЛ, другі - для виявлення осіб, не інфікованих ВІЛ, але дали позитивну реакцію при скринінговому тестуванні. Тому скринінгові тести володіють високою чутливістю, т. е. майже не дають хибнонегативних результатів, а підтверджуючі тести володіють високою специфічністю, т. е. майже не дають хибнопозитивних результатів. У поєднанні ці тести дають точні і надійні результати, які дозволяють виявити заражені препарати крові і поставити діагноз ВІЛ-інфекції. Однак існують біологічні фактори, що знижують точність цих тестів; можливі й лабораторні помилки. Тому в кожній лабораторії, проводить тести на антитіла до ВІЛ, має бути розроблена бездоганна програма контролю якості цих тестів. Не треба забувати і про те, що надійність лабораторних досліджень ніколи не буває абсолютною і що їх результати завжди повинні розцінюватися як доповнення до клінічного діагнозу.

Період вікна і виявлення ВІЛ-інфекції на ранніх термінах зараження:

Антитіла до ВІЛ починають вироблятися незабаром після зараження, але час їх появи залежить від багатьох факторів, зокрема, від стану імунної системи пацієнта і властивостей вірусу. Важливо відзначити, що антитіла можуть бути присутні в крові вже на ранніх термінах після зараження, але концентрація їх буває нижче межі чутливості деяких методів (період вікна). Перші тест-системи виявляли антитіла майже у всіх ВІЛ-інфікованих через 6-12 тижнів після зараження. Новітні тест-системи, в тому числі ловушечный ІФА третього покоління, виявляють антитіла через 3-4 тижні після зараження. Термін між зараженням і діагнозом ВІЛ-інфекції можна скоротити на кілька днів, застосовуючи методи виявлення антигенів ВІЛ, і ще на кілька днів, застосовуючи методи виявлення РНК ВІЛ. Якщо використовувати всі описані методи, діагноз ВІЛ-інфекції у більшості хворих можна встановити вже через 2-3 тижні після зараження. Наявні в продажі тест-системи для скринінгу на антитіла до ВІЛ володіють дуже високою і приблизно однаковою чутливістю, достатньою для виявлення більшості ВІЛ-інфікованих (так званої епідеміологічної чутливістю). Однак різні тест-системи розрізняються по аналітичної чутливості, т. е. по здатності виявляти низькі рівні антитіл, які мають місце до завершення сероконверсії.

Є тест-системи, призначені для виявлення IgM-антитіл до ВІЛ, однак вони не знайшли широкого застосування в ранній діагностиці ВІЛ-інфекції, оскільки IgM-антитіла не завжди виробляються на ранніх термінах після зараження. Деякі тест-системи третього покоління одночасно виявляють IgM - і IgG-антитіла до ВІЛ і мають більш високу аналітичною чутливістю.

Діагностика ВІЛ

Зважитися пройти обстеження на ВІЛ може здаватися страшним, тим не менш, це захворювання піддається лікуванню, тому важливо здати аналізи, при підозрі на контакт з ВІЛ-інфікованим. Якщо ваш аналіз виявиться позитивним, рання діагностика та спостереження за перебігом ВІЛ допоможе вашому лікарю з'ясувати, прогресує хвороба і визначити, коли найкраще розпочинати лікування.

Лікар може порекомендувати вам пройти консультацію психолога до і після тестування, зазвичай це можна зробити в лікарні або медичному центрі, де ви будете перевірятися на СНІД. Це дасть вам можливість:

• Обговорити свої страхи, пов'язані з тестуванням.
• Дізнатися, як можна знизити ризик зараження, якщо тест виявиться негативним.
• Дізнатися, як не заразити ВІЛ інших, якщо тест виявиться позитивним.
• Задуматися над особистими питаннями, наприклад, над тим, як ВІЛ вплине на вас у соціальному, емоційному, професійному та фінансовому планах.
• Дізнатися, що необхідно робити, щоб якомога довше залишатися здоровим.

Виявити вірус можливо за допомогою спеціальних тестів. Процес тестування полягає у виявленні антитіл, які виробляються організмом у відповідь на проникнення вірусу.

1-й тест - імуноферментний аналіз (ІФА). Це найбільш поширений метод діагностики. Через три місяці після потрапляння вірусу в кров, в організмі людини накопичується та кількість антитіл, яку може визначити імуноферментний аналіз. Приблизно в 1% випадків він дає хибно або помилково негативні результати.

Псевдонегативний результат може бути отриманий, якщо антитіла до вірусу не встигли виробитися або на термінальній стадії Сніду, коли вірусу в крові настільки багато, що клітини CD-4 і антитіла майже відсутні. Якщо ти хочеш упевнитися, що твій негативний результат не є насправді хибнонегативних, має сенс перездати ІФА ще раз через 3 місяці.

Хибнопозитивний результат в основному виявляється при обстеженні пацієнтів з хронічними інфекційними, аутоімунними, онкологічними та деякими іншими захворюваннями, а також у разі вагітності. Тому будь-який позитивний результат обов'язково перевіряють на більш чутливому тесті - імуноблоті. Позитивний результат імуноблоту після позитивного ІФА достовірний на 99, 9% - це максимальна точність для будь-якого медичного тесту.

2-й тест - імуноблот (Імунний Блотинг). Цей тест визначає наявність специфічних антитіл до ВІЛ. Результат може бути позитивним, негативним і сумнівним (або невизначеним).

Невизначений результат може означати, що в крові людини є присутнім ВІЛ, але організмом вироблений ще не весь спектр антитіл. Як правило, по закінченні 1-3-6 місяців з моменту отримання сумнівного результату в сироватці з'являються одне за іншим всі антитіла і ВІЛ. У цьому випадку сумнівний результат є свідченням початковій стадії ВІЛ-інфекції. Невизначений результат імуноблоту також може означати, що людина не інфікована ВІЛ, але в його організмі є антитіла, схожі на антитіла до ВІЛ. Такий результат буває у хворих на туберкульоз, онкохворих, реципієнтів, які отримують багатократні гемотрансфузії (переливання крові), у вагітних жінок. При невизначеному результаті ІБ пацієнт перебуває під наглядом лікаря-інфекціоніста і повторює аналіз через 1, 3 і 6 місяців.

3-й тест - полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР). Він використовується для визначення РНК і ДНК вірусу. Це дуже ефективна і чутлива реакція, що дозволяє отримати результат, досліджуючи ДНК всього однієї клітини шляхом множення (або ампліфікації) специфічних послідовностей ДНК. ПЛР використовується для:

• визначення наявності або відсутності самого ВІЛ в "період вікна" і при неясному результаті імуноблоту;
• для визначення, який вірус присутній в організмі - ВІЛ-1 і ВІЛ-2; - для визначення та контролю вірусного навантаження;
• для визначення ВІЛ-статусу новонароджених, народжених від ВІЛ-інфікованих матерів;
• у службах переливання крові.

Чутливість даного тесту дуже висока: він виявляє сам вірус, причому через короткий час (в середньому близько 10-ти днів) з моменту можливого зараження. Однак ця ж висока чутливість дозволяє тесту реагувати і на багато інші інфекції, що призводить до частих хибнопозитивних результатів. Тому за результатами цього тесту ніколи не ставиться остаточний діагноз.

Проведення ПЛР вимагає складного лабораторного устаткування і високої кваліфікації фахівців. Метод є дуже дорогим і тому в масовому тестуванні на ВІЛ, яке, відповідно до законодавства, проводиться для населення безкоштовно, застосовуватися не може.

4-й тест - так званий експрес-тест. Його застосовують в екстрених ситуаціях (наприклад, під час операцій за життєвими показаннями або в пологах). Проведення експрес-тесту не вимагає складного обладнання та високої кваліфікації персоналу, але його результат повинен бути згодом підтверджений стандартним тестуванням на ВІЛ.

Діагностика ВІЛ-інфекції при добровільне консультування та тестування

У більшості медичних установ країн клінічний діагноз ВІЛ-інфікування встановлюється після серологічних аналізів, в результаті яких за допомогою непрямого діагностичного методу виявляються антитіла до ВІЛ у сироватці крові пацієнта. Найбільш поширений метод визначення антитіл - це твердофазний імуноферментний аналіз (ІФА або ELISA), при проведенні якої потрібне спеціальне обладнання для оцінки зміни забарвлення зразків на планшеті. Так як розвиток антитіл до ВІЛ відбувається через кілька тижнів після зараження, проводяться тести дають негативний результат протягом "періоду вікна" між інфікуванням і реакцією антитіл. Більш сучасні експрес-тести засновані на використанні методів аглютинації, абсорбції і зміни колірних характеристик, які можна спостерігати неозброєним оком. У деяких випадках (напр.при народженні дитини у ВІЛ-інфікованої матері) використовуються більш прямі методи діагностики і виявлення безпосередньо вірусу, а не імунної відповіді. Однак ці методи рідко застосовуються в країнах. Існує три найбільш поширені тесту на виявлення вірусу. Це - метод визначення до антигену Р24 (Р 24 - білок, що входить до складу вірусу ВІЛ); метод виділення вірусу в культурі; і метод ампліфікації генетичної інформації ВІЛ (реакції ланцюга полімерази або PCR).

Всесвітня організація охорони здоров'я (ВООЗ) рекомендує використовувати три різних підходи при проведенні тестів на ВІЛ залежно від таких трьох факторів: поширеність ВІЛ-інфекцій у популяції, чутливість і специфічність використовуваних методів виявлення антитіл і мета проведених тестів (скринінг проб крові, контроль та діагностика). Так як в умовах центрів добровільного консультування і тестування (ДКТ) тести на ВІЛ проводяться в цілях діагностики, використовувані методи повинні відрізнятися високою чутливістю (тобто володіти здатністю до виявлення всіх достовірно позитивних результатів) і високою специфічністю (тобто виключати хибно позитивні результати). Повторний аналіз позитивних проб у різних тестових форматах дозволяє підвищити специфічність отриманих результатів.

В даний час на ринку діагностичних препаратів є десятки тестових наборів для проведення досліджень на ВІЛ. Служби ДКТ повинні взяти на озброєння тестові протоколи, відрізняються максимальною чутливістю і специфічністю при виявлення антитіл. Як правило, розробка в кожній країні найбільш оптимальних методів проведення тестів на ВІЛ - це обов'язок державних організацій і установ (міністерств охорони здоров'я, національних програм по боротьбі з ВІЛ-інфекціями, національних контрольних лабораторій). Стосовно до кожної розглянутої методики необхідно враховувати наступні фактори:

• наукова обґрунтованість;
• існуюча мережа лабораторій;
• наявність контрольної (референс) лабораторії та її можливості якісного контролю;
• пропускна спроможність (тобто число пацієнтів, тестованих протягом робочого дня);
• побажання пацієнтів;
• особливості порядку (протоколу) проведення тестів (отримання результатів в той же день або призначення додаткового прийому пацієнта)
• вартість в довгостроковій перспективі.

Наявність високоякісних експрес-тестів на ВІЛ практично всюди допомагає уникнути головної труднощі в роботі центрів ДКТ - необхідності для пацієнтів повторно звертатись до центру для отримання результатів аналізів. При використанні діагностики ІФА пацієнтам доводиться чекати результатів аналізів не менше 72 годин. Досвід показує, що від 20 до 40 % пацієнтів не звертаються повторно центри для того, щоб отримати результати аналізів. Використання експрес-діагностики дозволяє значно поліпшити доступ до ДКТ. Крім того, наявні дані свідчать про те, що застосування експрес-тестів дозволяє підвищити якість роботи з профілактики, надання медичної допомоги та надання пацієнтам необхідної психологічної і соціальної підтримки. Якщо результати тестів негативні, пацієнти можуть дізнатися про них у день здачі крові на аналіз і одночасно отримати додаткову консультацію у профілактичних цілях. При позитивних результатах хворим в найкоротший термін надається медична допомога і необхідна психологічна та соціальна підтримка. Деякі фахівці дотримуються тієї точки зору, що при використанні методу ІФА час очікування результатів може бути використано пацієнтами для більш глибокого осмислення інформації, отриманої під час консультації до проведення тестових процедур. Однак такого ж результату можна добитися, використовуючи експрес-діагностику і одночасно передбачивши досить тривалий проміжок часу між консультацією і відбором проби крові для проведення аналізу. Швидке отримання результатів аналізів особливо необхідно для попередження трансмісії вірусу від матері до дитини, а також при проведенні профілактичної терапії опортуністичних інфекцій та профілактики після контакту з джерелом можливого зараження. Впровадження експрес-методів, особливо тих з них, в яких використовується цільна кров, а сироватка, дозволяє розширити аналітичні можливості та процедури, пристосувавши їх до вимог різних установ та до побажань пацієнтів. До цих процедур відносяться метод послідовних тестів та метод паралельних тестів.

Метод послідовних тестів. При використанні цього методу всі особи проходять експрес аналіз на ВІЛ. При позитивному результаті проводиться додаткове тестування на іншій тест-системі. При відсутності кореляції результатів двох тестів, проводиться ще один аналіз на третій тест-системі за експрес-методом. Таким чином, тести проводяться послідовно.

Метод паралельних тестів. При використанні цього методу всі пацієнти проходять аналіз на двох тест-системах одночасно (тобто паралельно). При розходженні результатів (це трапляється приблизно в 1% випадків) проводиться третій тест за експрес-методом.

Нижче наводяться переваги і недоліки цих двох методів.

Метод послідовних тестів

Вимірювання вірусного навантаження

Тест на вірусне навантаження визначає, скільки вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ) присутня в крові. Перший раз вірусне навантаження вимірюється, коли у вас діагностують ВІЛ-інфекцію. Це первинне вимірювання служить відправною крапкою, і всі наступні виміри будуть порівнюватися саме з першим показником. Оскільки вірусне навантаження може змінюватися з дня в день, її тенденція в динаміці за часом використовується для визначення того, чи не посилюється інфекція. Якщо тенденція вірусного навантаження знизилася за кількома останніми замірами, це означає, що інфекцію вдалося придушити.

Для вимірювання вірусного навантаження використовується один з видів тестів:

• Зворотна транскриптаза - полімеразна ланцюгова реакція (ПЦР)
• Тест на розгалужену-ланцюгову ДНК
• Тестування методом ампліфікації, заснованої на послідовності нуклеїнових кислот

Ці тести вимірюють кількість генетичного матеріалу (РНК) ВІЛ в крові. Однак кожен тест по-різному відображає результати, тому важливо через час використовувати той же вид тесту.

Навіщо проводити тестування

Вимірювання вірусного навантаження проводиться з метою:

• Спостереження за змінами кількості копій вірусної РНК у крові
• Вибору оптимального лікування
• Спостереження за ефективністю лікування

Ваш лікуючий лікар може призначити вам інший графік проходження вимірювань вірусного навантаження, проте найпоширенішим графіком є наступний:

• Якщо ви не приймаєте високоактивну антиретровірусну терапію (ВААРТ), вам необхідно вимірювати вірусне навантаження кожні 3-4 місяці.
• Якщо ви приймаєте антиретровірусне медикаментозне лікування, то:
  • Вірусне навантаження вимірюється до початку лікування, і цей показник буде вважатися базовим.
  • Наступне вимірювання проводиться через 4-8 тижнів після початку лікування для визначення реакції організму на ліки. Коли ви починаєте лікування або переходьте на нові ліки, очікується зниження вірусного навантаження.
  • Якщо відбувається очікуване зниження вірусного навантаження і показник числа CD4+ клітин залишається стабільним, вашу вірусне навантаження необхідно виміряти через 3-4 місяці. Показник числа CD4+ клітин говорить про те, наскільки добре функціонує ваша імунна система.

Лікуючий лікар може прийняти до уваги вимірювання вірусного навантаження, а також показник числа CD4+ клітин для того, щоб прийняти рішення про найкращий час для початку антиретровірусної терапії.

Як підготуватися до тесту

Ніякої спеціальної підготовки не потрібно.

Як проводиться тест

Медичний працівник, який проводить забір крові, буде виконувати наступні дії:

• Накладе еластичну пов'язку навколо вашої руки вище ліктя, щоб зупинити приплив крові. Це збільшує вени, які знаходяться нижче рівня пов'язки, що полегшує потрапляння голки у вену.
• Протре голку спиртом.
• Введе голку у вену. Може знадобитися більше однієї спроби.
• Прикріпить до голці трубку для забору крові.
• Коли збереться необхідна кількість крові, зніме пов'язку з вашої руки.
• Накладе марлевий компрес або ватний тампон на місце проколу шкіри голкою, після того, як вийме її.
• Спочатку притисне місце проколу, а потім накладе пов'язку.

Якими будуть відчуття

Ви можете нічого не відчути під час уколу, а можете відчути незначний біль в момент проходження голки крізь шкіру. Деякі люди відчувають пекучий біль, поки голка знаходиться у вені. Тим не менше, більшість людей не відчувають ніяких негативних відчуттів (або ж вони мінімальні) під час введення голки у вену. Ваші хворобливі відчуття будуть залежати від майстерності медичного працівника, який буде брати пробу крові, а також від стану ваших вен і вашої чутливості до болю.

Ризики

Існує незначна ймовірність проблем, пов'язаних з необхідністю забору крові з вени.

• У місці проколу може утворитися невелика гематома. Щоб уникнути появи, кілька хвилин потримайте в цьому місці ватний тампон, притиснувши її пальцем.
• У рідкісних випадках після забору крові відень може опухнути. Це називається запалення вени, або флебітів. Для лікування такого стану на місце опухання теплий компрес накладають кілька разів в день.
• Безперервне кровотеча може стати проблемою для людей, які страждають порушеннями згортання крові. Аспірин, варфарин (Каумадин) та інші кроверазжижающие препарати можуть підвищити ймовірність кровотечі. Якщо у вас проблеми з кровотечею або згортанням, або якщо ви приймаєте кроверазжижающие препарати, попередьте про це лікаря до того, як він почне брати у вас кров на аналіз.