Меню

Протокол полімеразної ланцюгової реакції зі зворотною транскрипцією в реальному часі (ВІД-ПЛР РВ, Realtime RT-PCR) CDC для виявлення і дослідження вірусу грипу А(H1N1)

ВСЕСВІТНЯ ОРГАНІЗАЦІЯ Охорони ЗДОРОВ'Я

  • 28 квітня 2009 нова версія 1
  • (30 квітня 2009) нова версія 2
  • (6 жовтня 2009)

Співпрацює Центр грипу ВООЗ на базі Центру контролю і профілактики захворювань (CDC), Атланта, США, є протокол полімеразної ланцюгової реакції зі зворотною транскрипцією в реальному часі (ВІД-ПЛР РВ, Realtime RT-PCR) для виявлення і дослідження вірусу грипу А(H1N1)

Протокол полімеразної ланцюгової реакції зі зворотною транскрипцією в реальному часі (ВІД-ПЛР РВ, Realtime RT-PCR) Центру контролю і профілактики захворювань США (CDC) для виявлення і дослідження вірусу грипу А(H1N1) (версія 2009)

Загальні коментарі

Обмеження відповідальності: Назва постачальників і виробників згадується в якості прикладу джерела відповідних товарів. Включення їх в протокол не є свідченням Центрів контролю та профілактики захворювань, що підтверджують якість товару

Допущення: Проведення даного аналізу вимагає наявність базових знань методів ВІД-ПЛР.

Принцип методу: Протокол полімеразної ланцюгової реакції зі зворотною транскрипцією в реальному часі (ВІД-ПЛР РВ, Realtime RT-PCR) Центру контролю і профілактики захворювань (CDC) для виявлення і дослідження свинячого грипу включає набір олігонуклеотидних праймерів і гідролізних зондів з двома мітками (Taqman®), які призначені для використання при проведенні аналізів ВІД-ПЛР РВ для якісного виявлення і дослідження in vitro вірусу свинячого грипу в зразках з дихальних шляхів і вірусних культурах. Комплект праймерів і зондів InfA призначений для універсального визначення вірусів грипу групи А. Комплект праймерів і зондів swInfA призначений спеціально для виявлення всіх вірусів свинячого грипу A. Комплект праймерів і зондів swH1 розроблений спеціально для виявлення свинячого грипу H1. Даний аналіз проводиться при необхідності підтвердити наявність вірусу грипу групи А в зразках (не піддаються типуванню), взятих з дихальних шляхів хворих з підозрою на вірус свинячого грипу групи А.

Обмеження по використанню протоколу: Дані протоколи були оптимізовані із застосуванням кількісної одношаговой ВІД-ПЛР з зондами (комплект для кількісної одношаговой ПЛР Invitrogen SuperScriptTMIII Platinum®), яка дала зіставні результати з термоциклерной системою 96-лункового формату, такої як ПЛР в реальному часі Applied BiosystemsTM (Applied BiosystemsTM real-time PCR 7000, 7300, 7500, ін), детекторні системи ПЛР у реальному часі BioRad (BioRad real-time PCR iQTM або iQ5TM) або обладнання для кількісної ПЛР Stratagene (Stratagene QPCR MX4000, MX3000 або MX3005).

Інформація з техніки безпеки: Обробка зразків повинна проходити у відповідності з існуючими державними нормами щодо біологічної безпеки.

Допустимі зразки: Зразки з дихальних шляхів, включаючи бронхоальвеолярный лаваж, трахеальний аспірат, мокротиння, назофарингеальний або орофарингіальний аспірату або змиви і назофарингеальний або орофарингіальний мазки. Взяття мазків проводитися за допомогою тампонів тільки з синтетичного матеріалу (поліестер або дакрон (Dacron®)) на алюмінієвих або пластикових стрижнях. Використання ватяних тампонів і дерев'яних стрижнів для забору зразків не рекомендується. Зразки, взяті тампонами, импрегнированными альгинатом кальцію, не допускаються.

Критерії відбракування:

  • Зразки, які не зберігалися при температурі 2-4°C (≤ 4 днів) або не були заморожені при температурі -70°C і нижче.
  • Зразки, що не ввійшли в список допустимих зразків, представлений вище.

Виділення нуклеїнових кислот: Проведення аналізів, заснованих на ампліфікації нуклеїнових кислот, методом ЗТ-ПЛР залежить від кількості і якості матричних РНК у зразках. Перед тестуванням зразків методики виділення РНК повинні бути визнані придатними і перевірені на виділення і чистоту.

Було показано, що наявні у продажу комплекти для виділення РНК, включаючи комплект QIAamp® Viral RNA Mini Kit або RNeasy® Mini Kit (QIAGEN), комплекти Roche MagNA Pure Compact RNA Isolation Kit, MagNA Pure LC RNA Isolation Kit II і Roche MagNA Pure Total Nucleic Acid Kit, дозволяють синтезувати высокоочищенную РНК при дотриманні рекомендованих виробником процедур для екстрагування зразків.

Матеріали

Реагенти:

1. Комплект гідролізних зондів (наприклад, Taqman®) для одношаговой кількісної ВІД-ПЛР

  • Комплект для одношаговой кількісної ПЛР Invitrogen SuperScript™III Platinum® (кат. № 11732-020 або 11745-100).

2. Стерильна дистильована вода молекулярно-біологічного якості (не містить Рнкази і Днкази)

3. Прямий та зворотній праймери (40 мкм)

4. Зонди з двома мітками (10 мкм)

5. Зразки позитивного контролю

Допоміжні матеріали:

  1. Лабораторний розмічальний олівець
  2. Охолоджуючий контейнер для микроцентрифужных пробірок (1, 5 мл) і реакційних пробірок (0, 2 мл) 96-лункового модуля для ПЛР
  3. 20-мкл і 200-мкл регульовані піпетки і наконечники з аерозольним бар'єром
  4. Стрипи і планшети для реакційних пробірок ПЛР (0, 2мл)
  5. Оптичні кришечки для стрипів
  6. Стерильні вільні від нуклеази 1, 5 мл микроцентрифужные пробірки
  7. Одноразові рукавички без тальку

Обладнання:

  1. Микроцентрифуга
  2. Мішалка
  3. Детекторний модуль ПЛР у реальному часі з 96-лунковим реакційним модулем ампліфікатора.

Порядок дій

Підготовка:

1. Запобігання контамінації зразків

З-за високої чутливості аналізів з використанням флуорогенных 5'-нуклеаз щоб уникнути хибнопозитивних амплификаций при проведенні даних аналізів необхідно вживати особливих заходів обережності.

1 2 3 4 Наступна »


Джерело: http://www.eurolab.ua

Коли звернутися до лікаря

Якщо у вас з'явилися перші симптоми грипу, зверніться до лікаря. Рання діагностика і лікування допоможуть уникнути ускладнень і скоротити тривалість захворювання.

Основні зимптомы грипу

До найпоширенішим сипмтомам грипу належать:

  • Лихоманка
  • Головний біль
  • Надзвичайна втома
  • Кашель
  • Фарингіт
  • Нежить і закладеність носа
  • Біль у м'язах
  • Нудота, блювота і пронос (ці симптоми частіше проявляються у дітей)

Крім того, якщо ваше захворювання триває вже кілька днів, а симптоми погіршуються, негайно зверніться до лікаря. Ці симптоми можуть вказувати на вторинну або бактеріальну інфекцію. Зверніться до лікаря, якщо:

  • У вас знову з'явилася лихоманка
  • Ваша лихоманка триває більше трьох днів
  • У вас утруднене дихання
  • Ви не можете зупинити блювоту
  • У вас з'явився стридор при диханні
  • Ваші симптоми погіршуються з кожним днем

Якщо у вас є хронічні захворювання, такі як хвороба серця, астма, обструктивна хвороба легенів, діабет, або ВІЛ/СНІД, дуже важливо звернутися до лікаря при появі перших симптомів грипу, щоб уникнути ускладнень. Крім того, в разі гострої утрудненості дихання, важкої головного болю або ригідності потиличних м'язів, викличте швидку допомогу.

Як лікар ставить діагноз грипу

Зазвичай, лікар може поставити діагноз, спираючись на симптоми. Крім цього, він бере зразок слини для ідентифікації вірусу грипу. Подібний тест займає від п'яти до 30 хвилин.

Антивірусні препарати

Згідно CDC, США рекомендується для використання два види антивірусних препаратів: Tamiflu і Relenza.

  • Tamiflu схвалений для профілактики і лікування грипу серед людей у віці від 1 року і старше.
  • Relenza призначений для лікування грипу серед людей старше 7 років.

Tamiflu і Relenza потрібно прийняти протягом 48 годин після прояви першого симптому грипу. Ці препарати можуть зменшити тривалість грипу при їх використанні на ранніх етапах. Ваш лікар допоможе вам визначити необхідність антивірусних препаратів.

Джерело: http://www.eurolab.ua

Аналізи для виявлення генітального герпесу - Медичний портал EUROLAB




Яндекс.Метрика